Возникновение синдрома миокардоза представляет особую опасность в том случае, когда первичной причиной диспротеинемии является недостаточность сердца с застойными явлениями в печени,-что создает порочный круг. При различных патологических воздействиях на сердце могут возникать некрозы миокарда, не связанные с нарушениями коронарного кровообращения (П. Д. Горизонтов, 1961; А. Л. Мясников, 1962; Selye, 1961; Raab, 1959, 1963).
Экспериментально некрозы миокарда удалось получить при воздействиях на центральную нервную систему (И. К. Шхва-иабая, 1961; А. Л. Мясников к др., 1963), путем раздражения симпатических нервов и введения катехоламинов (W. Raab, 1963), под влиянием комбинированного воздействия стероидных гормонов, электролитов и так называемых стрессорных факторов (Selye, 1961), при рентгеновском облучении, сочетающемся со срывом высшей нервной деятельности (Г. Ахметели, 1963), и других воздействиях. Конкретные биохимические механизмы, лежащие в основе развития подобных некрозов миокарда, еще не изучены.
Развитие некроза миокарда является заключительным этапом сложных нарушений обмена электролитов на клеточной мембране, энергетических процессов в митохондриях и функции сократительных белков в мышечной фибрилле.
Реакция в лимфоидной ткани При помощи электронного микроскопа было показано, что в цитоплазме многих крупных лимфоидных клеток содержится большое количество рибосом (Binet a. Mathe, 1962; Andre-Schwartz, 1964).
Рибосомы образуют венчик, причем каждый из них состоит из 4-6 рибосом. У многих клеток очень мало или совсем нет ретикулума, в центральной части протоплазмы имеется небольшое количество митохондрий и слабо развитый аппарат Гольджи.
Наблюдается увеличение веса лимфатических узлов, осуществляющих дренаж первичных опухолевых или кожных трансплантатов, а также увеличение в них содержания ДНК (Andreini, Drasher a. Mitchison, 1955; Burwell, 1962). В лимфатических узлах крысы крупные лимфоидные клетки становятся радиоактивно меченными при введении животному Н3-тими-дина.
Эти результаты дают основание предполагать, что пролиферация клеток обусловливает увеличение веса стимулированных лимфатических узлов-и содержания в них ДНК. Однако частично это увеличение связано с притоком малых лимфоцитов в узлы из крови или лимфы.
К этому выводу пришли на основании экспериментов, в которых крысам с пересаженными им кожными аллотрансплантатами вводили внутривенно меченные радиоактивным методом лимфоциты, выделенные из грудного протока нормальных сингенных доноров. Увеличение веса лимфатических узлов Через 24 ч после инъекции в регионарных лимфатических узлах оказалось больше радиоактивно меченных клеток, чем в таких же нестимулированных узлах (McGregor, неопубликованное наблюдение).
Burwell (1962) изучал изменения клеток в лимфатических узлах, осуществляющих дренаж первичных костных трансплантатов у кроликов, используя также электронный микроскоп.
Он пришел к выводу, что большинство крупных лимфоидных клеток (те, у которых слабо развит эндоплазматический ретикулум) превращается в клетки, размер которых постепенно уменьшается. Самые маленькие клетки этой линии по размеру напоминают малые лимфоциты, но сохраняют структуру крупных лимфоидных клеток.
У этих малых лимфоидных клеток имеются выраженные ядрышки и интенсивно окрашенная пиронином цитоплазма.
Burwell высказал предположение, что мелкие лимфоидные клетки являются именно теми клетками, при посредстве которых осуществляются иммунологические реакции, а клетки, подобные им, с более обильным эндоплазматическим ретикулумом в центральной части цитоплазмы выделяют в кровь антитела. Выраженные ядрышки По поводу происхождения крупных лимфоидных клеток в лимфатичес ких узлах, осуществляющих дренаж аллотрансплантатов, было много споров.
Многие исследователи указывали, что они образуются из клеток зародышевых центров (Andre е. а., 1962), из ретикулярных клеток (Scothorne, 1957) и из малых лимфоцитов (Burwell, 1962; Gowans a. McGregor, 1965).
Имеются данные, свидетельствующие о том, что малые лимфоциты являются предшественниками этих клеток.
Малые лимфоциты можно стимулировать тканевыми изоантигенами in vivo и in vitro. Лимфоциты, стимулированные таким образом, дифференцируются в клетки-бласты, которые морфологически идентичны крупным лимфоидным клеткам, наблюдающимся в лимфатических узлах осуществляющих дренаж первичных гомотрансплантатов.
Стимуляция малых лимфоцитов in vivo.
Для изучения процессов, происходящих в клетках во время реакции трансплантат против хозяина, использовали радиоавтографию и хромосомные маркеры.
Gowans (1962) внутривенно вводил крысам-гибридам Fx клетки, выделенные из лимфы грудного протока доноров родительской линии. Через 12 ч после инъекции в селезенке появились значительные изменения.
Крупные лимфоидные клетки, появились в периартериолярных участках белой пульпы, где их количество увеличивалось за счет малых лимфоцитов.
Стимуляция малых лимфоцитов На основании радиоавтографических исследований Gowans пришел к выводу, что многие (возможно, все) крупные лимфоидные клетки образовались из малых лимфоцитов донора.
Подобные эксперименты позволяют предполагать, что малые лимфоциты крысы могут развиться в крупные лимфоидные клетки в лимфоидной ткани новорожденных аллогенных реципиентов (Porter a. Cooper, 1962b) и мышей, получивших летальные дозы облучения (Gowans е. а., 1962). Эти крупные лимфоидные клетки образуют новую линию делящихся клеток.
Почти все крупные лимфоидные клетки в белой пульпе селезенки крыс и мышей, которым ввели очищенные взвеси малых лимфоцитов, становятся радиоактивными после инъекции Н3-тимидина (Gowans, 1962; Gowans е. а., 1962; Ford, Gowans a. McCullagh, 1966). Эксперименты, проведенные на химерах крыса-мышь, прямо указывают на то, что малые лимфоциты превращаются в новые клетки через промежуточную стадию делящихся клеток-предшественников.
В этих экспериментах мышам, получившим большие дозы облучения, вводили малые лимфоциты крыс.
Происхождение делящихся клеток определяли по кариотипу клеток в метафазе. Крупные лимфоидные клетки Почти все делящиеся клетки в лимфатических узлах селезенки и брыжейки оказались клетками крысы.
Подобные эксперименты с применением хромосомных маркеров дают основание считать, что малые лимфоциты донора превращаются в делящиеся клетки во время реакции трансплантат против хозяина у новорожденных крыс (Porter a. Cooper, 1962а).
Тканевые антигены обеспечивают стимуляцию, необходимую для того, чтобы малые лимфоциты начали увеличиваться и делиться.
Бластогенез. редко происходит в тканях сингенных и аллогенных реципиентов, которые иммунологически толерантны к тканям линии донора (Gowans, личное сообщение).
Более того, процесс деления клеток, судя по включению Н3- ти-мидина в ДНК, в селезенке подавлен, если донор лимфоцитов обладает толерантностью к коже хозяина.
К этому выводу пришли на основании исследования, в котором крысам, получившим 1000 рад общего рентгеновского облучения, через 24 ч внутривенно вводили лимфоциты от доноров, линии Lewis в количестве 106 на 1 г веса. Как показано каждому реципиенту лимфоцитов вводили в брюшную полость через 48 ч 1 мкк Н3-тимидина на 1 г веса.
Тканевые антигены Данные, указывающие на то, что специфическая активность ДНК в селезенке крыс-гибридов получивших лимфоциты от нетолерантных доноров, значительно превышала активность, наблюдаемую у реципиентов сингенной линии Lewis. И наоборот, радиоактивность ДНК селезенки была явно меньше у крыс-гибридов когда донор лимфоцитов был иммунологически толерантным к коже хозяина.
Происходило иммунологически специфическое подавление синтеза ДНК: это явление наблюдалось только у реципиентов, ткани которого содержали изоантигены, к которым у донора была толерантность.
Кроме того, что малые лимфоциты крыс вызывают реакцию трансплантат против хозяина, они могут вызвать разрушение старых кожных трансплантатов у иммунологически толерантных хозяев. Изменения клеток в лимфоидных тканях, которые связаны с развитием толерантности, подобны изменениям, наблюдаемым во время реакции трансплантат против хозяина.
Это сходство свидетельствует о том, что у толерантных животных происходит стимуляция малых лимфоцитов не только изоантигенами, имеющимися в коже, но и такими же изоантигенами, имеющимися в лимфоидной ткани. Эта интерпретация соответствует тому факту, что селезенки крыс, в которые вводили живые клетки селезенки или костного мозга, вызвав таким образом развитие толерантости, частично колонизируются клетками, образовавшимися из клеток донора (Billingham е. а., 1962) Малые лимфоциты крыс Многие вещества при добавлении к малым лимфоцитам in vitro могут вызвать их увеличение и деление.
Фитогемагглютинин, смесь веществ, взятых из красной фасоли (Ра-seolus vulgaris), является особенно мощным стимулирующим средством. Малые лимфоциты, культивируемые с фитогемагглютинином, увеличиваются в размере; увеличенные клетки содержат повышенное количество базофильной цитоплазмы.
Ядро увеличивается, и в полностью развившейся клетке находится выраженное ядрышко. Лимфоциты, стимулированные фитогемагглютинином, синтезируют большое количество РНК и протеина, в конце концов происходит деление клеток (MacKinney, Stohlman а. Brecher, 1962; Cooper a. Rubin, 1965).
Митогенное действие фитогемагглютинина и ему подобных веществ дает основание думать, что по крайней мере часть реактивных рецепторов в лимфоците является карбогидратами. М-ацетил-Б-галактозамин задерживает включение С14-тимидина в лимфоциты миндалин человека (Воberg е. а., 1968).
В этих исследованиях было продемонстрировано, что фитогемагглютинин присоединяется к лимфоцитам, но добавление сахара приводит к диссоциации.
Ввиду того что ни стимуляция клеток, ни торможение процесса связывания полностью не подавляются сахаром, нельзя сделать вывод, что в связывающих рецепторах на клетке содержится N-ацетил-D-галактозамин.
Стимуляция малых лимфоцитов in vitro Возможно, другой сахар может оказаться более эффективным в этом отношении. Powell и Leon (неопубликованные эксперименты) нашли, что другой митогенный протеин, содержащийся в бобах, — конка-наваллин А можно получить в более однородной форме, чем фитогемагглютинин, и этот материал может связываться с выраженными лимфоцитами периферической крови человека.
Связь с лимфоцитами и стимуляция клеток в значительной степени подавляются метил-а-О-маннозидом.
На этом основании хочется сделать вывод, что на лимфоцитах имеется несколько видов рецепторов связи, которые вступают во взаимодействие с различными митогенными агентами. Тот факт, что антисыворотка, направленная против у-глобулина данного аллотипа, стимулирует специфически лимфоциты кроликов, вырабатывающих глобулин этого аллотипа (Sell a. Gell, 1965), дает основание предполагать наличие протеиновых рецепторов.
Увеличение малых лимфоцитов in vitro и последующее деление стимулированных клеток можно наблюдать и измерять в смешанных популяциях клеток.
Однако в этих условиях происходит стимуляция только малых лимфоцитов. К этому выводу пришли на основании исследований с применением взвесей клеток, меченных НЛтимидином, состоящих почти исключительно из малых лимфоцитов (Marshall a. Roberts, 1963; Rieke, 1966), а также наблюдений за отдельными клетками с применением киносъемки (Marshall a. Roberts, 1965) Применение взвесей клеток Rieke и Schwartz (1967) вводили крысам Н3-тимидин так, чтобы пометить преимущественно малые лимфоциты с короткой продолжительностью жизни или только долгоживущие малые лимфоциты, выделенные из лимфы.
Авторадиограммы культур лимфоцитов, стимулированных фитогемагглютини-ном, показали, что малые лимфоциты с короткой продолжительностью жизни увеличиваются и делятся в 4-6 раз чаще, чем долгоживущие клетки.
Лимфоциты, взятые у животных, стимулированных антигеном, могут увеличиваться и делиться при отсутствии фитогемагглютинина, если в питательную среду добавить соответствующий антиген (Pearmain, Lycette a. Fitzgerald, 1963).
Антигены не оказывают никакого действия или оказывают очень небольшое действие на лимфоциты животных, не стимулированные антигеном, и в отличие от фитогемагглютинина не могут стимулировать лимфоциты от очень молодых животных с наследственной гипогаммаглобулинемией или от взрослых животных с приобретенной гипо-гаммаглобулинемией (Tadenberg a. Hirschhorn, 1964; Bradley а. Oppen-heim, 1967). Эти результаты свидетельствуют о том, что бласт-трансформация обусловлена по крайней мере двумя механизмами.
Стимуляция фито-гемагглютинином, вероятно, является неспецифической и распространяется на большое количеств клеток в культуре.
Стимуляция антигеном является специфической и направлена на относительно небольшое количество клеток. Лимфоциты, взятые у животных Лимфоциты периферической крови от различных животных могут стимулировать друг друга в клеточных культурах, в которых нет ни фитогемагглютинина, ни специфических антигенов (Bain, Vas a. Lowenstein, 1964; Bach a. Hirschhorn, 1964).
Степень взаимной стимуляции зависит от генетического родства доноров (Bain, Vas a. Lowenstein, 1964). Лимфоциты животных, связанных близким родством (дети одних родителей или родители и дети), стимулируют друг друга менее эффективно, чем лимфоциты, взятые у неродственных животных.
В смешанных культурах лимфоцитов однояйцевых близнецов стимуляции не наблюдается. Концентрация радиоактивности лейкоцитов человека, культивируемых в среде, содержащей Н3-тимидин.
Инкубировали либо отдельно клетки от однояйцевых близнецов, либо вместе с клетками, взятыми от другого индивидуума.
Результаты показали, что в культурах, приготовленных из клеток неродственных индивидуумов, клетки включили гораздо большетимидина, чем клетки в культурах, приготовленных из клеток, взятых у близнецов.
Эксперименты, в которых использовали смешанные культуры лимфоцитов, указывают на то, что тканевые изоантигены могут стимулировать малые лимфоциты, способствуя их дифференцировке и делению; однако ничего неизвестно относительно пролиферативной способности клеточной популяции каждого донора в инкубационной среде.
Концентрация радиоактивности лейкоцитов человека Если обработать клетки одного донора мито-мицином С, ингибитором ДНК-зависимого синтеза РНК, можно измерить реакцию другой необработанной популяции клеток (Bach a. Voynow, 1966). Эти результаты можно принять с двумя оговорками.
Во-первых, Hubay, Slos и Powell (неопубликованное наблюдение) установили, что митомицин С неполностью подавляет стимуляцию культивируемых лимфоцитов человека фитогемагглютинином, даже если в культурах содержатся большие концентрации этого вещества, чем те, которые использовали Bach и Voynow.
Данные, подтверждают эту точку зрения.
Они показывают, что лимфоциты, выращенные в присутствии фитогемагглютинина и ми-томицина С, инкорпорируют больше Н3-тимидина, чем такое же количество лимфоцитов, выращенных в средах, не содержащих этих агентов.
Эти результаты говорят о том, что инкорпорацию тимидина в смешанных клеточных культурах, содержащих необработанные и обработанные митомицином С лимфоциты, нельзя объяснить исключительно синтезом ДНК, осуществляемым необработанными клетками. Во-вторых, обработка клеток митомицином С, возможно, нарушает их способность стимулировать необработанные лимфоциты.
Обработка клеток Эту проблему изучал Wilson (1967), используя смешанные культуры лимфоцитов, приготовленные из лимфоцитов гибридов Fx и одной из родительских линий. В этой комбинации клеток стимулируются только лимфоциты донора линии родителей; лимфоциты крыс линии F1 не реагируют на родственные клетки, потому что они содержат все тканевые изоантигены донора лимфоцитов, принадлежащего к родительской линии.
Wilson нашел, что стимуляция значительно понижается в смешанных культурах лимфоцитов, содержащих необработанные лимфоциты родителя и клетки гибридов Flt которые были предварительно обработаны митомицином С. Тканевые изоантигены неодинаковы по своей способности стимулировать лимфоциты in vitro. В смешанных культурах лимфоцитов, приготовленных из клеток крыс, стимуляция происходит только тогда, когда у доноров имеется различие в важном локусе Ag-B (Wilson, 1967; Silvers, Wilson a. Palm, 1967).
Лимфоциты человека могут также реагировать на продукт только одного гена или, возможно, продукты близко расположенных генов, подобные тем, которые составляют локус Н-2 у мыши (Bach a. Voynow, 1966).
Клетки, которые развиваются из малых лимфоцитов в результате реакции на фитогемагглютинин, были названы бласт-клетками, хотя еще не удалось продемонстрировать, что они являются предшественниками морфологически самостоятельной линии клеток (Marshall a. Roberts, 1965). Тканевые изоантигены Однако изменения клеток в смешанных культурах лимфоцитов подобны тем, которые происходят во время реакции трансплантат против хозяина у интактных животных.
В обоих случаях малые лимфоциты превращаются в новые клетки, подобные малым лимфоцитам, через промежуточную стадию клеток-предшественников. Убедительного доказательства, что малые лимфоциты от нестимулиро-ванных доноров можно стимулировать таким образом in vitro, чтобы они начали вырабатывать антитела, нет. Sell, Rowe и Gell (1965) не удалось выявить иммуноглобулины в лимфоцитах кроликов, стимулированных фи-тогемагглютинином, стафилококковым фильтратом, бараньей антикроличьей сывороткой или специфической антиаллотипной сывороткой.
Hirschhorn (1963) нашел, что лимфоциты человека, выращенные с фитогемагглютини-ном, образуют повышенное количество у-глобулина. Образование у-глобулина в этих условиях, вероятно, отражает общее увеличение белкового синтеза, и не является специфической реакцией стимулированных клеток, выражающейся в повышенном образовании антител.
Имеются данные, подтверждающие эту точку зрения.
Так, Parenti с сотрудниками (1966) нашли, что количество у-глобулина, образуемое лимфоцитами в культурах, содержащих фитогемагглютинин, увеличивается значительно меньше, чем содержание других клеточных белков. Убедительное доказательство Имеются следующие данные, указывающие на то, что реакция смешанных лимфоцитов в культуральной среде является иммунологической (Wilson, 1967): 1) в смешанных культурах, состоящих из лимфоцитов гибридов Fx и клеток животного родительской линии, трансформируются только родительские клетки; 2) когда донор — родитель толерантен к ткани гибрида Flt его лимфоциты не проявляют реакции, хотя обычно они реактивны по отношению к неродственной части лимфоцитов; 3) лимфоциты крыс, тимэктомированных при рождении, проявляют чрезвычайно пониженную реактивность.
Лимфоциты человека, стимулированные фитогемагглютинином, токсичны по отношению к аллогенным фибробластам (Hirschhorn a. Ripps, 1965) и клеткам печени (Holm a. Perlmann, 1967) in vitro; на клетки печени син-генного донора это действие не распространяется. В противоположность этому Brent и Medawar (1966а) нашли, что у интактных животных, стимулированные лимфоциты проявляют реакцию против сингенных и аллогенных реципиентов.
Они вводили морским свинкам внутрикожно клетки лимфатических узлов, стимулированные in vivo у-глобулином человека, наблюдали за развитием реакции в области инъекции.
Через 24 ч воспалительная реакция одинаковой интенсивности развивалась и у сингенных и у аллогенных реципиентов. Лимфоциты человека, стимулированные фитогемагглютинином Первоначальная реакция в коже морских свинок не связана с иммунологическим механизмом, о чем свидетельствует способность стимулированных лимфоцитов вызывать воспаление сингенных тканей.
Вряд ли приходится сомневаться в том, что специфические факторы распознавания вовлечены в реакции нормального лимфоцитарного переноса и другие трансплантационные реакции, связанные с пересадкой, в которых участвуют лимфоциты.
Возможно, как предполагает Gowans (1966), антитела на поверхности лимфоцитов способствуют их соединению с клетками-мишенями, против которых они действуют. Взаимодействие между клетками вызывает неспецифические процессы, в результате которых происходит трансформация лимфоцитов и гибель клеток-мишеней.
Эксперименты Ruddle и Waksman (1967) можно интерпретировать таким образом: они культивировали специфически сенсибилизированные клетки лимфатических узлов с растворимыми антигенами. Вещество, выделявшееся в результате этой реакции, разрушало сингенные и аллогенные фибробласты.
Возможно, это явление имеет отношение к реакции отторжения, где взаимодействие между сенсибилизированными лимфоцитами и антигенами, заключенными в клетках мишенях, способствует процессу отторжения (Wilson a. Billingham, 1967).
Данные, изложенные ранее в разделе Судьба тканевых трансплантатов, указывают на то, что клетки, образованные в ответ на гомотрансплантат, вовлечены в процесс отторжения.
Такие иммунологически активированные клетки определяют следующим образом: 1) по их способности передавать чувствительность к гомотрансплантату интактным реципиентам; 2) по их способности подавлять рост опухоли, содержащей изоантигены ткани линии донора; 3) по их способности вызывать воспалительную реакцию замедленного типа (иммунологическую реакцию переноса лимфоцитов) в коже линии донора и 4) по их цитопатогенному действию на клетки мишени in vitro.
Первоначальная реакция Лимфатические узлы, осуществляющие дренаж подкожных опухолевых трансплантатов (Mitchison, 1954) и обычных кожных трансплантатов (Billingham, Brent a. Medawar, 1954), являются мощными источниками иммунологически активированных клеток.
Клетки из регионарных лимфатических узлов более эффективны, чем клетки других лимфатических узлов, по своей способности передавать реципиентам чувствительность к гомотрансплантату.
Клетки регионарных лимфатических узлов более эффективны, чем другие клетки, также в индукции иммунологической реакции переноса лимфоцитов в коже морских свинок (Brent, Brown a. Medawar, 1962).
Иммунологически активированные клетки находятся не только в регионарных лимфатических узлах, осуществляющих дренаж области первичных кожных трансплантатов.
Регионарная лимфаденэктомия у специфически сенсибилизированных мышей никак не повлияла на приживление вторичных кожных трансплантатов (Billingham, Brent a. Medawar, 1954).
Лимфатические узлы, осуществляющие дренаж кожных трансплантатов, пересаженных на ушную раковину кроликов, представляются особенно важными в развитии чувствительности к гомотрансплантату (Vrubel a. Vrubelova, 1962). Однако даже у таких животных другие лимфатические узлы и селезенка, вероятно, содержат иммунологически активированные клетки.
Snell, Winn и Kandutsch (1961) сенсибилизировали мышей путем подкожного введения тимоцитов или измельченной ткани эмбриона. Осуществление иммунологической реакции Эти авторы продемонстрировали, что активированные клетки появляются сначала в регионарных лимфатических узлах и позже в других лимфатических узлах и селезенке.
У морских свинок, как и у мышей, иммунологическая реакция на первичные кожные трансплантаты начинается в регионарных лимфатических узлах. Затем реакция распространяется на другие лимфоидные органы (Brent, Brown a. Medawar, 1962).
Активированные клетки выбрасываются в кровь и лимфу вскоре после того, как они появятся в лимфоидной ткани.
Brent и Medawar (1966а) сенсибилизировали морских свинок внутривенным введением аллогенных клеток лимфатических узлов.
В течение 3 дней клетки, появившиеся в крови, могут вызвать иммунологическую реакцию переноса лимфоцитов в коже животного донорской линии. Billingham, Silvers и Wilson (1962) изучили вопрос о том, с какой скоростью развивается чувствительность к гомотрансплантату у мышей с первичными кожными трансплантатами.
Клетки из регионарных лимфатических узлов и периферической крови могут передавать чувствительность к гомотрансплантату нормальным мышам в течение приблизительно одинакового периода после пересадки.
В подобных экспериментах, проведенных на крысах, чувствительность передавали при помощи клеток, выделенных из грудного протока.
Эти эксперименты важны, так как подтверждают, что лимфоциты (как большие, так и малые) являются иммунологически активированными клетками. Иммунологически активированные клетки В экспериментах, в которых измерялся ток клеток из изолированных лимфатических узлов, установлено, каким образом реакция, возникающая в одном лимфатическом узле, может развиться в общую реакцию, вовлекающую все лимфатические узлы животного и его селезенку.
Исследования Hall и Morris (1962, 1963, 1965) представляют особый интерес. Эти авторы определяли количество и вид клеток, входящих в изолированные лимфатические узлы овец и выходящих из них. Скорость тока из нестимулированных подколенных лимфатических узлов варьировала от 2х104 до 105 клеток в час и была постоянной.
Приблизительно 98% клеток были малыми лимфоцитами; остальные клетки были большими лимфоцитами. В лимфатических сосудах, стимулированных различными растворимыми и артикулярными антигенами, наблюдалось мгновенное падение количества клеток, выделенных в эфферентную лимфу (Hall, Morris, 1963, 1965).
Пониженное образование клеток было временным и сопровождалось быстрым увеличением количества клеток, которое приблизительно через 40 ч после стимуляции в несколько раз превышало нормальное. Образование клеток постепенно возвращалось к норме через 120-150 ч. Наблюдалось также изменение состава клеток в лимфе, идущей из стимулированных антигенами лимфатических узлов.
Через 48 ч в лимфе было обнаружено много больших лимфоидных клеток (Hall е. а., 1967). Подобные изменения наблюдались в лимфе узлов, стимулированных аллогенными кожными трансплантатами, за исключением того, что между пересадкой и увеличением образования крупных клеток в эфферентной лимфе проходил более продолжительный период.
Активированные клетки в крови и лимфе Эксперименты показывают, что образование клеток и состав эфферентной лимфы значительно меняются после антигенной стимуляции.
Однако ничего неизвестно относительно вида клеток, которые делают иммунологические реакции более продолжительными и заключают в себе свойство иммунологической памяти. Этими клетками могут быть как крупные лимфоидные клетки, так и малые лимфоциты.
Крупные лимфоидные клетки и вновь образованные малые лимфоциты, по-видимому, имеют особое значение на ранней стадии реакции, когда они вырабатываются в лимфоидной ткани и выбрасываются в лимфу. Со временем иммунологическая память может стать свойством только малых долгоживущих лимфоцитов, которые продолжают циркулировать из крови в лимфу через все периферические лимфоидные органы животного (Gowans a. Uhr, 1966).
Большой продолжительностью жизни многих малых лимфоцитов и их способностью рециркулировать можно объяснить наличие активированных клеток в крови в течение более года после пересадки (Little е. а., 1962; Robinson е. а., 1965; Gowans a. Knight, 1964; Billingham, Silvers a. Wilson, 1962). Как гуморальные антитела, так и клетки принимают участие в иммунологической реакции на аллогенные ткани.
Относительная значимость антител и клеток зависит от вида пересаженной ткани и ее анатомического расположения. Изолированные клетки особенно уязвимы для антител, хотя клеточные механизмы, вероятно, также играют важную роль в отторжении свободно пересаженных тканей и органов.
Механизмы реакции отторжения трансплантата Изолированные клетки более чувствительны к гуморальным антителам, чем ткани и агрегированные клетки. Billingham и Sparrow (1954) продемонстрировали, что эпидермальные клетки, подвергавшиеся воздействию специфической антисыворотки in vitro, не вырастают, как эксплантаты, а на ортотопические кожные трансплантаты антисыворотка не действует.
Gabourel и Fox (1959) нашли, что изоантитела мышей не оказывают никакого действия на агрегированные L-фибробласты мышей в культуре, хотя позже Gabourel (1961) продемонстрировал, что изолированные фибробласты быстро разрушаются.
Большую чувствительность изолированных клеток обусловливают несколько факторов, в том числе тип антител, образованных в результате реакции на пересадку, и концентрация антител и комплемента на поверхности клеток-мишеней.
Различную резистентность отдельных клеток к антителам можно объяснить количеством антигенных рецепторов на клетках-мишенях. Winn (1960) подсчитал, что на лейкемических клетках мышей (особенно уязвимых для антител) может быть в 25 раз больше молекул изоантител, чем на саркоматозных клетках.
Е. МбПег и G. Moller (1962) пришли к такому же выводу.
Они выращивали разнообразные опухолевые клетки мышей в среде, содержащей изоантитела, и нашли прямую корреляцию между цитотоксичностью и количеством антител, адсорбированных клетками-мишенями. Цитотоксическое действие циркулирующих антител Большую цитотоксичность мышиных изоантител на гомозиготные лейкемические клетки, чем на клетки от гетерозиготных (гибридов Fx) доноров (Hellstrom, 1959), также можно было объяснить наличием изоантигенных рецепторов на мембранах клетки-мишени.
Как 19S — так и 75-изоантитела с Н-2-специфичностью могут связываться с опухолевыми клетками in vitro (Hellstrom и Moller, 1965).
Оба типа антител равноценны для агглютинации и гемолиза эритроцитов и разрушения ядерных клеток-игшеней in vitro.
Однако результаты не исключают возможности, что 19S — и 75-антитела отличаются в отношении их цитотоксиче-ской активности.
Это возможно благодаря критической стерической связи между сопредельными молекулами на поверхности клеток-мишеней, такой, как продемонстрировали для IgG в гемолитической системе бараньих эритроцитов Borsos и Rapp (1965).
Для того чтобы иммунная сыворотка была способна лизировать мышиные опухолевые клетки, требуются высокие концентрации комплемента.
Hellstrom и Moller (1965) сообщили, что комплемент, обычно присутствующий в мышиной сыворотке, в отличие от комплемента морской свинки не способен лизировать мышиные лимфоидные клетки, сенсибилизированные изо-антителами. Необходимость больших количеств комплемента в иммунной цитологической системе указывает, что если гуморальные антитела играют роль в реакции гомотрансплантации, то это должны быть комплементфиксирующие IgG и IgM. Цитотоксичность мышиных изоантител Резистентность культивируемых клеток к изоантителам соответствует таковой у интактных животных.
Пересаженные лейкемические клетки мышей более чувствительны к антителам, чем саркоматозные клетки; организованные ткани, такие, как кожа, высокорезистентны (Gorer, 1960).
Однако в определенных условиях даже отторжение кожных трансплантатов можно ускорить при помощи антител. Stetson с соавторами (1963) продемонстрировали, что введение высоких концентраций антител в ложе трансплантата способствует быстрому разрушению кожных трансплантатов.
Haskova с сотрудниками (1962) уничтожили толерантность к кожным ксенотрансплан-татам у уток большими дозами (от 10 до 22% веса) специфической иммунной сыворотки.
Ясно, что эксперименты, в которых применяли либо местные инъекции изоиммунной сыворотки, либо внутривенные инъекции гетеро-логичной сыворотки, не отражают явлений, происходящих в процессе нормальной реакции на кожные аллотрансплантаты.
Нельзя игнорировать тот факт, что все попытки пассивно передать чувствительность к гомотрансплантату при помощи сыворотки были неудачными, тогда как при помощи живых клеток чувствительность может быть передана (Billingham a. Brent, 1956; Stetson, 1963). Гуморальные антитела могут предупредить развитие и проявление чувствительности к гомотрансплантату.
Это пародоксальное явление, называемое иммунологическим усилением, было продемонстрировано на животных, которым предварительно вводили либо лиофилизированные ткани линии донора, либо тканевые экстракты, либо специфическую иммунную сыворотку.
Резистентность культивируемых клеток Антитела особенно способствуют удлинению периода жизни опухолевых трансплантатов (Kallis, 1958) и оказывают лишь незначительное действие на первичные кожные трансплантаты (Billingham, Brent a. Medawar, 1956а; Brent a. Medawar, 1961).
Иммуноподавляющее действие усиливающих антител основано на их способности связываться с антигенными рецепторами на клетках-мишенях (Hellstrom a. Moller, 1965). Опухолевые клетки, покрытые усиливающими антителами, менее эффективны, чем обнаженные клетки, по своей способности вызывать чувствительность к гомотрансплантату; покрытые антителами клетки также более резистентны к цитопатогенному действию фиксирующих комплемент антител и сенсибилизированных клеток.
Кроме того, усиливающие антитела могут иметь неспецифическое действие на рост опухоли (Hellstrom a. Moller, 1965).
Усиливающее действие изоантител мышей связано преимущественно с фракцией yG (Moller, 1966). Ovary (1966) предполагал, что к этому имеют отношение, по-видимому, у 1-глобулины, так как эти иммуноглобулины не могут фиксировать комплемент.
Эта проблема может быть разрешена в процессе изучения феномена усиления у животных, получивших очищенные фракции.
В процессе реакции отторжения ортотопических кожных трансплантатов эффекторные механизмы, обусловленные клетками, играют более важную роль, чем гуморальные механизмы.
Феномен усиления Эта точка зрения основана на сходстве сенсибилизации к гомотрансплантату с реакциями гиперчувствительности замедленного типа; считают, что и в том и в другом случае большое значение имеют сенсибилизированные клетки (Lawrence, 1959b). Сходство заключается в следующем: 1) соответствующие антигены могут вызывать медленно развивающуюся воспалительную реакцию в тканях специфически сенсибилизированных животных, 2) живые лимфоидные клетки от специфически сенсибилизированных доноров могут передавать чувствительность нормальным реципиентам, тогда как сыворотка от таких доноров неэффективна в этом отношении.
Как упоминалось, сенсибилизированные клетки, образовавшиеся в лимфоидных органах животных вследствие пересадки им трансплантатов, имеют отношение к реакции отторжения. Предполагают, что цитопатогенное действие сенсибилизированных клеток можно объяснить следующим образом: сенсибилизированные клетки синтезируют особый вид связанных с клеткой антител.
Возможно, эти антитела остаются навсегда в клетке, в которой они образовались, или, может быть, они абсорбируются нормальными лимфоцитами или макрофагами и таким образом пассивно их сенсибилизируют.
Антитела, связанные с клеткой, могут быть тем специфическим фактором, который вызывает реакцию отторжения трансплантата. Согласно другой гипотезе, взаимодействие связанных с клеткой антител и изоантигенов клеток-мишеней вызывает вторичные явления, такие, как образование антител или выделение фармакологически активных агентов в очаг реакции.
Цитотоксическое действие клеток Действие сенсибилизированных лимфоцитов на клетки in vitro Лимфоидные клетки специфически сенсибилизированных доноров атакуют и разрушают клетки-мишени in vitro (Wilson a. Billingham, 1967).
Wilson (1965a), например, изучал действие клеток лимфатических узлов, взятых у крыс, которым вводили аллогенные опухолевые клетки. Через 5-6 дней после инъекции клетки из лимфатических узлов, осуществляющих дренаж той области, куда была произведена инъекция, оказались токсичными для клеток-мишеней в культуре.
Появление сенсибилизированных клеток в лимфоидной ткани шло параллельно развитию сенсибилизации к гомотрансплантату (Billingham, Silvers a. Wilson, 1962).
Wilson (1965а) нашел, что только небольшая часть лимфоцитов в лимфатических узлах и лимфе грудного протока сенсибилизированных крыс иммунологически активна.
Количественные исследования показали, что одна активированная клетка может разрушить одну клетку-мишень. Эксперименты с клетками лимфы грудного протока особенно интересны, так как они позволили установить, что клетками-агрессорами являются малые лимфоциты.
Janowsky с сотрудниками (1964), подтверждая точку зрения Wilson, нашли, что малые и средние лимфоциты селезенки специфически сенсибилизированных мышей токсичны по отношению к выращенным фибробластам.
Лимфоциты могут убивать клетки-мишени в питательной, среде, в которой нет термолабильных факторов сыворотки, таких, как комплемент (Wilson, 1963). Действие сенсибилизированных лимфоцитов Сенсибилизирование (судя по способности клеток разрушать мишени), по-видимому, является свойством интактных клеток.
Экстракты клеток из лимфатических узлов специфически сенсибилизированных доноров неэффективны (Wilson, 1965а).
Эти результаты свидетельствуют о том, что если цитопатогенное действие обусловлено фактором, связанным с лимфоцитами, то либо фактор не отделяется от сенсибилизированных клеток, либо он теряет активность в Несвязанной форме.
Цитотоксическая реакция, осуществляемая при помощи сенсибилизированных лимфоцитов, имеет две стадии.
Первая стадия выражается в. прикреплении лимфоцитов к клеткам-мишеням, а вторая — в повышенной биосинтетической активности прилипших клеток (Rosenaua.
Moon, 1961; Wilson, 1965b). Неспособность сенсибилизированных лимфоцитов, заключенных в камеры с микропоровыми фильтрами, разрушать свои мишени (Rosenau, 1963) иллюстрирует важность прикрепления лимфоцитов к мембранам клеток-мишеней.
Однако прикрепление само по себе не вызывает разрушения клеток-мишеней. Гидрокортизон может блокировать цитопатогенное действие сенсибилизированных лимфоцитов, хотя он не предупреждает связывание лимфоцитов с клетками-мишенями.
Более того, присоединение лимфоидных клеток сингенных доноров к клеткам-мишеням вследствие воздействия гетерологичной антисыворотки не приводит к разрушению клеток-мишеней (МбПег, 1965).
